臨床執業醫師考試輔導資料:重組dna技術的原理
更新時間:2013-05-20 09:08:48
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摘要 環球網校免費提供2013年生物化學復習資料
2013臨床執業醫師考試臨近,環球網校醫學考試網搜集了一些考試知識點,希望可以幫助大家順利通過考試。
一個完整的基因克隆過程應包括:目的基因的獲取,克隆基因載體的選擇與改造,目的基因與載體的連接,重組dna分子導入受體細胞,篩選出含感興趣基 因的重組dna轉化細胞。實現上述過程需要一些重要的工具酶,如限制性內切核酸酶連接酶等。限制性內切核酸酶是一類識別dna特意序列的內切核酸酶,它的 作用特異切開雙鏈dna.
①目的基因的獲取:外源基因又稱目的基因,來源于幾種途徑:化學合成、酶促合成cdna,制備的基因組dna及pcr技術。
②基因載體的選擇與構建:可作為基因載體的dna分子有質粒dna、噬菌體dna和病毒dna,它們經適當改造后仍具有自我復制能力,或兼有表達外源基因的能力。
③外源基因與載體連接:連接方式有:黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。
④重組dna導入宿主細胞:外源dna與載體在體外連接成重組dna分子,需將其導入宿主細胞。隨受體細胞生長、增殖,重組dna分子得以復制、擴增。
⑤重組體的篩選:鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組dna分子確實帶有目的基因,即可得到目的基因的克隆,這一過程即為篩選或選擇。
⑥克隆基因的表達:在原核或真核表達體系中進行表達,獲得所需要的蛋白質。
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