2013臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試臨近，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)搜集了一些考試知識(shí)點(diǎn)，希望可以幫助大家順利通過(guò)考試。

　　一個(gè)完整的基因克隆過(guò)程應(yīng)包括：目的基因的獲取，克隆基因載體的選擇與改造，目的基因與載體的連接，重組dna分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，篩選出含感興趣基 因的重組dna轉(zhuǎn)化細(xì)胞。實(shí)現(xiàn)上述過(guò)程需要一些重要的工具酶，如限制性內(nèi)切核酸酶連接酶等。限制性內(nèi)切核酸酶是一類(lèi)識(shí)別dna特意序列的內(nèi)切核酸酶，它的 作用特異切開(kāi)雙鏈dna.

　　①目的基因的獲取：外源基因又稱(chēng)目的基因，來(lái)源于幾種途徑：化學(xué)合成、酶促合成cdna，制備的基因組dna及pcr技術(shù)。

　　②基因載體的選擇與構(gòu)建：可作為基因載體的dna分子有質(zhì)粒dna、噬菌體dna和病毒dna，它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制能力，或兼有表達(dá)外源基因的能力。

　　③外源基因與載體連接：連接方式有：黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。

　　④重組dna導(dǎo)入宿主細(xì)胞：外源dna與載體在體外連接成重組dna分子，需將其導(dǎo)入宿主細(xì)胞。隨受體細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖，重組dna分子得以復(fù)制、擴(kuò)增。

　　⑤重組體的篩選：鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組dna分子確實(shí)帶有目的基因，即可得到目的基因的克隆，這一過(guò)程即為篩選或選擇。

　　⑥克隆基因的表達(dá)：在原核或真核表達(dá)體系中進(jìn)行表達(dá)，獲得所需要的蛋白質(zhì)。

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