2015執業西藥師知識一：酶的純化
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2015執業藥師藥學專業知識一復習資料環球網校醫學考試網小編整理如下，希望對考友們有所幫助。
酶是蛋白質，因此凡用于蛋白質的純化手段均適用于酶的純化，如鹽析法、聚乙二醇沉淀法、有機浴劑分級沉淀法、等電點法、選擇性沉淀法、各種柱層析法(吸附層析、離子交換層析、凝膠過濾)、各種電泳法及親和層析等。不同之處是酶的純化過程尚需選用迅速簡便的活力測定方法，以追蹤酶的去向。在選用酶的活力測定方法時，分析方法的迅速要比其精確度更為重要。如寧可要一個需時5min，準確度為5%的方法;也不要一個需時30min，準確度為0.5%的方法。在建立活力測定法之后，再根據各單元純化步驟及活力分布情況用列表形式表達，表的內容包括：操作步驟、總體積、酶濃度(每毫升酶活力)、總活力、蛋白質濃度mg/ml)、比活力(即純度、酶活力單位/毫克蛋白)、產率%(每步總活力除以第一步的總活力)和純化倍數(每步比活力除以第一步比活力)。
一個典型的酶純化過程常包括多個單元操作，各單元操作如何串聯，需靠實踐摸索。每經過一個步驟一般可提高酶純度2一3倍，總純度可提高數千倍，而總產率常僅百分之幾或十幾。總的原則是選用最少的步驟而能取得最好的純化效果、因為增加步驟勢必增加酶的丟失。通常對于含鹽濃度高的粗提取液一般不宜采用吸附法而多用鹽析法;對于低離子強度的酶溶液則可用吸附法或離子交換法。交替使用不同分級沉淀法常比單獨重復同一類型方法更能奏效。所以常將吸附法、鹽折法和有機溶劑分級沉淀法串聯起來進行純化。當這些方法仍達不到要求時，還可以采用一些包括電泳、層析法在內的其他類型純化方法。
當酶達到一定純度時，便可以進行結晶，結晶也是純化酶的有效手段之一。但應注意的是藥用酶有些并不需要結晶。酶的第一次結晶純度有時仍低于50%。酶的結晶通常可以在較純的酶液中添加硫酸銨、氯化鈉等鹽達到一定飽和度，使酶慢慢結晶出來。此時必須控制溫度和pH值。鹽濃度要逐漸提高，添加速度要慢，才能得到較好的結晶。有時在低溫下，用丙酮、乙醇等有機溶劑進行結晶。近年來采用平衡透析法，即將酶液裝人透析袋中，置于一定飽和度的鹽溶液中進行透折，這種操作可以獲得大量結晶。
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