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　　第五章 分光光度法(環球網校分享2017年執業藥師考試藥物分析復習要點第五章分光光度法)

　　第一節 可見紫外分光光度法

　　掌握可見--紫外分光光度法的基本原理和測定方法。掌握可見紫外分光光度法在藥物鑒別、檢查和含量測定中的應用。熟悉儀器的校正和檢定方法;紫外吸收光譜與物質結構的關系。了解紫外分光光度計的基本結構。

　　一、基本原理

　　波長200～400nm范圍稱為紫外光區，400～760nm稱為可見光區。物質吸收紫外和可見光區電磁波而產生的吸收光譜稱為紫外-可見吸收光譜。

　　1.光源：紫外光區通常采用氫燈或氘燈，可見光區采用鎢燈。

　　2.吸收池：玻璃池適用于370nm以上的可見光區，石英池適用于紫外、可見光區，通常僅在紫外光區使用。

　　三、紫外吸收光譜與物質結構的關系：紫外可見吸收光譜屬分子吸收光譜，是由分子的外層價電子躍遷產生的，也稱電子光譜。它與原子光譜的窄吸收帶不同。每種電子能級的躍遷會伴隨若干振動和轉動能級的躍遷，使分子光譜呈現比原子光譜復雜得多的寬帶吸收。

　　當分子吸收紫外可見區的輻射后，產生價電子躍遷。這種躍遷有三種形式：

　　(1)形成單鍵的σ電子躍遷。(2)形成雙鍵的π電子躍遷。 (3)未成鍵的n電子躍遷。

　　通常，未成鍵的孤對電子較易激發，成鍵電子中π電子較相應的σ電子具有較高的能量，反鍵電子則相反。故簡單分子中n→π* 躍遷需能量最小，吸收帶出現在長波方向;n→σ*及n→π* 躍遷的吸收帶出現在較短波段;σ→σ*躍遷吸收帶則出現在遠紫外區。

　　例題：物質分子吸收紫外光后，電子躍遷的類型為：A. n→σ* B. n→π* C. π→π* D. σ→σ* E .σ→π* 答案ABCD

　　四、吸收度的測定方法

　　1.對溶劑的要求：能充分溶解樣品，與樣品無相互作用，揮發性小，在測定波長處的吸收要符合要求。

　　2.空白對照實驗：將配制溶液用溶劑(空白溶液)裝入參比池里，調節儀器，使吸收度為0，去除溶劑和容器吸收、光散射。反射的影響。

　　3.測定波長確證：為提高測定方法靈敏度，減少測定誤差，吸收度一般在λmax處測定。

　　4.供試品溶液濃度：使吸收度在0.3～0.7范圍內。

　　5.儀器的狹縫寬度：以減少狹縫寬度時，供試品溶液吸收度不再增加為準。

　　五、應用

　　1.鑒別：(1)對比吸收光譜特征參數：核對供試品溶液λmax、 、A是否符合規定。可同時用幾個峰位作為鑒別依據

　　(2)比較吸收度比值的一致性：吸收峰較多時，規定幾個波長處吸收度比值作為鑒定標準

　　(3)對比吸收光譜一致性

　　2.雜質檢查

　　藥物在紫外-可見光區有明顯吸收，而雜質吸收弱;或雜質有明顯吸收而藥物無吸收，可通過控制吸收度限度來控制雜質量。

　　3.含量測定

　　(1)對照品比較法：供試品溶液和對照品溶液濃度及測定條件應盡可能一致

　　(2)吸收系數法：需對儀器進行嚴格校正和檢定

　　(3)計算分光光度法：通過數學處理消除樣品中干擾組分的干擾

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　　第二節 熒光分析法

　　了解熒光分析法的基本原理和應用;熒光光度計的基本結構。

　　一、基本原理(環球網校分享2017年執業藥師考試藥物分析復習要點第五章分光光度法)

　　熒光的產生：此化學物質能從外界吸收并儲存能量(如光能、化學能等)而進入激發態，當其從激發態再回復到基態時，過剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發光)。熒光發射的特點是：可產生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發光;而一旦停止供能，發光(熒光)現象也隨之在瞬間內消失。

　　發射熒光的光量子數亦即熒光強度，除受激發光強度影響外，也與激發光的波長有關。各個熒光分子有其特定的吸收光譜和發射光譜(熒光光譜)，即在某一特定波長處有最大吸收峰和最大發射峰。選擇激發光波長量接近于熒光分子的最大吸收峰波長，且測定光波量接近于最大發射光波峰時，得到的熒光強度也最大。

　　物質的激發光譜和熒光發射光譜，可以用作該物質的定性分析。當激發光強度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時，物質在一定濃度范圍內，其發射光強度與溶液中該物質的濃度成正比關系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，故熒光分析法應在低濃度溶液中進行。

　　二、熒光分光光度計

　　激發光源→激發光單色器→樣品池

　　↓

　　發射光單色器→檢測器→數據記錄處理

　　樣品池用低熒光材料制成，四面透光，發射光方向與激發光成直角。

　　三、應用：熒光分析可用于鑒別和含量測定。一般采用對照品比較法測定含量，靈敏度高、選擇性好，但干擾多、線性范圍窄，多用于需要高靈敏度和允許較大變異性的樣品分析。

　　第三節 紅外分光光度法

　　熟悉紅外分光光度法的基本原理以及在藥物鑒別、檢查中的應用。

　　了解紅外光譜儀的基本結構。

　　一、基本原理

　　紅外光譜是由分子的振動、轉動能極引起的光譜。當用一定頻率的紅外光照射某物質分子時，若該物質的分子中某基團的振動頻率與它相同，則此物質就能吸收這種紅外光，使分子由振動基態躍遷到激發態。其條件為：

　　1即分子振動必須伴隨瞬時偶極矩的變化。

　　2.紅外輻射光子的能量應與分子振動能級躍遷所需的能量相等。

　　因此，若用不同頻率的紅外光依次通過測定分子時，就會出現不同強弱的吸收現象。用T%-λ作圖就得到其紅外光吸收光譜。紅外光譜具有很高的特征性，每種化合物都具有特征的紅外光譜。用它可進行物質的結構分析和定量測定。

　　二、紅外光譜儀

　　光源-吸收池-單色器-檢測器-數據記錄和處理

　　三、應用

　　1鑒別：紅外光譜特征性強，鑒別時按《藥品紅外光譜集》中收載的制備方法制備，與該品種對照圖譜比較應一致。

　　2.檢查：目前，主要應用紅外光譜對無效或低效晶型進行檢查，依據藥物與其同質異晶雜質在特定波數的吸收有顯著差異

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