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2013檢驗主管技師考試臨床化學:免疫化學法測定個別蛋白質

更新時間:2012-11-05 09:14:55 來源:|0 瀏覽0收藏0

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  散射比濁法和透射比濁法由于測定方法簡便、快速而被廣泛使用。許多試劑盒供應抗血清及標準蛋白質,即可建立此測定法。此技術可以測定抗原-抗體復合物(沉淀顆粒)形成的量(終點法),亦可采用測定復合物形成的速率(動力學方法,即通過散射濁度計測定抗原-抗體混合反應復合物顆粒形成的時間,即反應速率。一定條件下,反應速率與反應體系中抗原的含量直線相關,可以通過制備標準曲線而計算)。

  現已有設計完善的帶微電腦進行數據處理的散射濁度計和透射濁度計,以免疫化學系統(immuno-chemicalsystem,ICs )可供應。免疫擴散法不需昂貴設備,放射免疫法則需要液體閃爍計數器及應用放射性同位素。

  現將幾種常用的免疫化學測定法的特點列表總結比較于表2-9、10中。

  表2-9 電泳與免疫化學檢測血清蛋白列表比較

法) 各種免疫化學分析法
前白蛋白 前白蛋白
白蛋白 白蛋白
α1球蛋白(區帶) α1抗胰蛋白酶
α1酸性糖蛋白
α1脂球蛋白
α1脂蛋白
甲狀腺激素結合球蛋白,皮質醇結合蛋白
α2球蛋白(區帶) 結合珠蛋白
α2巨球蛋白
銅藍蛋白
前β脂蛋白
β球蛋白(區帶) 轉鐵蛋白
血紅素結合蛋白
補體C­4,C3
β2微球蛋白
γ球蛋白(區帶) IgG,A,M,D,E
C反應球蛋白

  表2-10 幾種免疫化學測定方法的比較

準確性 檢測時間
散射比濁法 10mg/L 批內CV值<5% 幾分鐘(動力學法)
1小時 (終點法)
透射比濁法 20-30mg/L 批內CV值5%-10% 1小時內
免疫擴散法 >20mg/L 批間CV值5%-15% 1-2天
放射免疫法 μg/L 批內CV值5%-10% 幾小時

  關于免疫化學測定方法中的標準品和方法的標準化問題:含有準確含量的純抗原蛋白不易買到。制備的抗血清由于其來源不同,其特異性和靈敏度效價有很大差異,一個純蛋白制劑來制備高特異性的抗血清亦非輕易之舉。因此抗血清的制備和方法的標準化是方法推廣和使用的關鍵。據美國病理學會的研究報告,測 α1AT用同一標本,使用5種不同的方法在510個實驗室報告的結果從1.6-2.34g/L。同一研究中C3補體的測定采用了8種不同方法,測定結果為 149-282mg/L。

  世界衛生組織目前提供以下參考標準品:IgG 、IgA、IgM、IgD、IgE、αFP、CEA、Alb、C3、CER及TRP。使用國際單位(IU),沒有使用絕對的質量單位。美國疾病控制中心(CDC)供應的國家參考標準品人血清蛋白質含13種蛋白質,亦使用WHO的國際單位標明含量。

  由于不易獲得穩定的抗血清和標準化的參考蛋白質,各個實驗室還不得不根據自己的條件建立自己的正常參考值。

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