特異性血清學(xué)檢查$lesson$

　　自病毒分離成功以來，對(duì)本病的特異性診斷技術(shù)迅速建立，檢測(cè)對(duì)象已由血清抗體發(fā)展到尿液抗體，由檢測(cè)抗體發(fā)展到細(xì)胞內(nèi)抗原和尿中可溶性抗原，檢測(cè)方法也日新月異。近來用分子生物學(xué)技術(shù)如斑點(diǎn)雜交、原位雜交及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)已試用于EHF的診斷及發(fā)病機(jī)理研究。

　　1.免疫熒光技術(shù)(IFAT)為常規(guī)方法之一。用間接免疫熒光法檢測(cè)患者血清特異性IgM和IgG抗體，前者在第1病日即可檢出，第2病日陽性率88.2%，第3病日達(dá)100%;IgG在2病日即可檢出，4～5病日陽性率達(dá)75%。直接免疫熒光法，可檢出白細(xì)胞及尿沉渣細(xì)胞內(nèi)病毒抗原，用于早期診斷。

　　2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)　用雙抗體夾心法檢測(cè)可溶性抗原，用竟?fàn)幏�檢測(cè)阻斷抗體，特異、敏感，又可避免需要熒光顯微鏡。EHF-IgM捕獲法ELISA(Mac-ELISA)以不同病日血清IgM檢出率為97.7%，而IFAT法檢出率為88.7%，是一敏感、特異的診斷方法。

　　3.免疫粘附血凝法(IAHA)用于檢測(cè)抗體，其抗體滴度與免疫熒光抗體滴度相仿，又可區(qū)別不同類型病毒抗體。環(huán)球網(wǎng)校整理

　　李鎬汪和日本學(xué)者合作制出檢測(cè)EHF抗體的間接凝集試驗(yàn)方法，將漢坦病毒結(jié)合到硅化物顆粒上，制成直徑為1.8μm的抗原致敏顆粒，與稀釋的待檢血清反應(yīng)40分鐘可觀察結(jié)果，此法簡(jiǎn)便易行，非特異反應(yīng)少，敏感性好。

　　4.反向被動(dòng)血凝法(RPHA)用于檢測(cè)體液病毒抗原，與ELISA法滴度基本一致。

　　5.放射免疫法(RIA)國外用固相放射免疫法與ELISA進(jìn)行診斷及血清流行病學(xué)調(diào)查，其敏感性較免疫熒光法高10倍以上。

　　6.空斑減少中和試驗(yàn)(PRNT)中和抗體是EHFV感染后產(chǎn)生的一種重要抗體，是目前用于病毒血清學(xué)分型的主要依據(jù)。本法要求嚴(yán)格，操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)，難以在一般試驗(yàn)室開展。中和效價(jià)的高低與病型輕重有關(guān)，即重癥患者低，中型患者較高。

　　7.放射免疫沉淀試驗(yàn)(RIP)有報(bào)告用RIP對(duì)83份不同病日患者血清測(cè)定，抗EHFV-NP(核蛋白)抗體最早出現(xiàn)，大多在4病日便可測(cè)出，其后為抗G2(糖蛋白)，抗G1僅在少數(shù)標(biāo)本中方能測(cè)出。三種病毒結(jié)構(gòu)蛋白抗體滴度也是抗NP最高，抗G1最低。

　　8.應(yīng)用cDNA探針檢測(cè)EHFV-RNA的研究，最近國內(nèi)外先后獲得了病毒的M、S片段的多個(gè)cDNA克隆，可用于制備檢測(cè)EHFV核酸的探針。檢測(cè)EHF患者血液、尿液和外周血淋巴細(xì)胞中的EHFV核酸，具有較好的特異性和較高的敏感性，為發(fā)病機(jī)理和診斷研究提供了先進(jìn)手段。