初級檢驗技士輔導：微生物學檢查(2)

　　檢驗方法及鑒定：

　　1)直接鏡檢：無菌取膿汁、痰、滲出液和腦脊液(離心后取沉渣)涂片，經革蘭染色后鏡檢。根據其形態、染色、初步診斷。

　　2)分離培養：血液標本注入50ml葡萄糖肉湯或含硫酸鎂肉湯增菌培養，置35℃，24小時后開始觀察有無細菌生長，若均勻混濁，溶血及膠胨狀生長，則接種于血瓊脂，進一步鑒定，若無細菌生長，于48-72小時后觀察。血液標本也可注入血培養瓶培養。

　　膿汁、尿道滲出液、腦脊液離心沉淀物，可直接接種血瓊脂。35℃18-24小時培養，可見直徑2-3mm，產生不同色素的菌落。金黃色葡萄球菌在菌落周圍有透明的溶血環。

　　常用普通營養瓊脂平板、血瓊脂平板和高鹽甘露醇培養基，血培養用葡萄糖增菌培養基。

　　菌落特征、色素形成、形態染色、血漿凝固酶等，甘露醇發酵。

　　3)鑒定試驗

　　①觸酶試驗：細菌產生的過氧化氫酶催化雙氧水生成水和氧氣，產生氣泡。

　　方法：取營養瓊脂上的菌落置于潔凈試管內或潔凈玻璃片上，滴加3%H2O2溶液數滴，觀察結果，如立即有大量氣泡產生為陽性，不產生或氣泡量少為陰性。葡萄球菌屬為觸酶陽性。

　　②血漿凝固酶：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產生的一種與其致病性有關的侵襲性酶，分為結合型和游離型兩種。其作用是使血漿中纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。

　　結合型：位于細胞壁上，能直接作用于血漿中纖維蛋白原，使之轉化為纖維蛋白，環繞菌體形成凝塊。---玻片法檢測

　　游離型：產生后分泌到胞外，不能直接作用于血漿中纖維蛋白原，但可激活血漿凝血酶原，使之轉化為凝血酶，后者作用于纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，導致血漿凝固。---試管法檢測。

　　③甘露醇發酵試驗。

　　④新生霉素敏感試驗：凝固酶陰性的葡萄球菌的鑒別，采用該方法。一般新生霉素耐藥者多為腐生葡萄球菌，敏感者為表皮葡萄球菌。

　　⑤同時進行體外藥物敏感試驗：對苯唑西林的敏感試驗是必須的，可將葡萄球菌分為苯唑西林敏感的葡萄球菌和苯唑西林耐藥的葡萄球菌。同時有必要測定β-內酯胺酶及萬古霉素的敏感性。

　　金黃色葡萄球菌：觸酶試驗陽性、血漿凝固酶試驗陽性、甘露醇試驗陽性、對新生霉素敏感。

　　表皮葡萄球菌：觸酶試驗陽性、血漿凝固酶試驗陰性、對新生霉素敏感。

　　腐生葡萄球菌：觸酶試驗陽性、血漿凝固酶試驗陰性、對新生霉素耐藥。

　　4)耐藥物性試驗：檢測耐甲氧西林的金葡菌，耐甲氧西林的表葡菌，耐萬古霉素的金黃色葡萄球菌，耐萬古霉素的表皮葡萄球菌。

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