第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SD孓PAGE）。抗原等蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶負(fù)電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動，分子量越小，泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見（只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶）。第二階段為電轉(zhuǎn)移。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。第三階段為酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜（相當(dāng)于包被了抗原的固相載體）依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色。